L’immunocytochimie (ICC) constitue une aide précieuse pour affiner le diagnostic cytologique. Cependant sa réalisation est parfois limitée par des problèmes de reproductibilité. Une des contraintes est représentée par la diversité des échantillons et de leur préparation. L’harmonisation des étapes préanalytiques constitue un pré-requis indispensable afin d’obtenir une bonne reproductibilité. Les résultats obtenus seront différents selon que l’on travaille sur lame d’étalement, sur cytospins ou bien à partir de prélèvements fixés en milieu liquide. Il est possible d’harmoniser la fixation de lames d’étalement ou de cytospins avant la technique d’ICC. Il sera nécessaire de connaitre la nature du fixateur s’il s’agit d’un milieu liquide. En effet, le formol justifiera un démasquage antigénique préalable. Certains anticorps nécessiteront obligatoirement un démasquage antigénique, notamment pour les antigènes nucléaires, cela ne sera pas systématiquement nécessaire pour des antigènes membranaires ou cytoplasmiques. Les techniques de démasquage devront être ajustées à la cytologie (temps plus courts avec les pH élevés). Nous présenterons quelques exemples à partir d’anticorps fréquemment utilisés en cytologie.